Вальбум и Дернби окончательно устанавливают, что состав бульона, а именно наличность в нем пептона и альбумоз, имеет первенствующее значение для выхода токсина. Хотя, как это в свое время было доказано опытами в лаборатории Страуса, токсин получается и в безбелковой среде – за счет составных частей самих бактерий, но его количество ничтожно, а для образования больших количеств необходимо присутствие тех продуктов разложения белков, которые получаются в результате начала действия вторичных протеаз, т. е. триптаз, дальнейшее же переваривание альбумоз и распадение их на аминокислоты лишают соответ- ствущий бульон способности давать выход токсина. Изучая параллельно размножение бактерий в культурах, изменение их реакции, содержание бактерий в культурах, изменение их реакции, содержание в них белков, альбумоз и аминокислот наряду с нарастанием и упадком токсичности, Дернби и Вальбум пришли, между прочим, к следующим выводам. Дифтерийные [культуры] обнаруживают протеолитическое действие, параллельно которому уменьшается концентрация водородных [ионов?]. В первой стадии протеолиза токсичность растет, достигает максимума и затем падает, вероятно вследствие продолжающегося протеолиза. Для хорошего роста дифтерийных бацилл нужны продукты распада белков, в большем количестве. Но для получения сильного токсина необходимы альбумозы или сложные пептиды, те же пептоны (Шапото), которые состоят из глубоко разложенных производных, обеспечивают хороший рост, но плохой выход токсина. Ослабление токсина при кислой реакции есть отчасти резервибельный процесс. Протеолитический фермент, как трипсин, эрепсин, триптаза из дрожжей, лейкоцитов, Вас. prodygino, Вас. pyocyaneus и смесь дифтерийных бактерий быстро уничтожают токсин. Триптаза дифтерийных бацилл не столько выделяется в бульон, сколько содержится в телах бактерий. Применение опыта Вальбума с нарастанием токсичности при прибавлении свежего бульона к густому токсину или измельченным бактериям снова подтверждено. Липоиды, извлекаемые петролейным эфиром из токсина или из бактерий, не ядовиты. Все приводимые факты были объяснены следующим предположением. Токсин происходит главным образом вследствие протеолиза альбумоз специфическими протеазами, выделяющимися из трупов автолизируемых бактерий. Эти протеазы разлагают альбумозы и пептоны, бульона и самих бактерий на более простые соединения. Промежуточные продукты этого разложения и являются токсином, который разлагается и уничтожается дальнейшим протеолизом. В конечном итоге токсин, таким образом, должен быть отнесен к полипептидам (Bioch. Ztschr., т. 130, тетрадь 4–6).
Интересным дополнением к изложенным исследованиям представляется появившаяся несколько раньше (Bioch. Ztschr., т. 130, тетрадь 1–3) работа Дрейера. Он приготовлял токсин на плацентарном бульоне и нашел, что постепенным прибавлением кислоты к токсическому фильтрату вызывается появление мути, которая при отстаивании дает осадок. Этот осадок заключает в себе весь токсин, как можно убедиться, растворив его в слабой щелочи. Это открытие позволяет получать токсин в более чистом и очень концентрированном виде. Кроме того, Дрейер доказал, что наибольшую ядовитость токсин (при ремеровском титровании) обнаруживает при pH от 8,6 до 8,8. Поэтому он различает наличную (actuelle) токсичность от абсолютной. Вторая получается при доведении реакции до оптимальной. На основании своих исследований Дрейер, так же как и Дернби и Вальбум, относит дифтерийный токсин к полипептидам. Близкое отношение к предыдущим работам имеет найденная Рамоном (Sos de Biol, 1923, № 10 и 49) реакция токсина с антитоксином. Он доказал, что сильный токсин дает с антитоксином осадок, который действует на организм так же, как и смесь, из которой он был получен. Он нашел, кроме того, что токсичность свежих культур и способность их преципитироваться антисывороткой наступают параллельно, так что этим дается возможность титровать сыворотку и токсин in vitro. Находка Рамона уже подтверждена другими исследователями (Рено).
Вопросы вирусологии
Фильтрующиеся вирусы
Открытие фильтрующихся вирусов явилось следствием, хотя и отдаленным, работ Пастера о произвольном зарождении. Для получения чистых, т. е. лишенных микробов, но по возможности неизмененных органических растворов им была применена фильтрация через изобретенные Шамберланом[13] свечи из фарфора, прокаленного при 1200°. Пропущенные через эти фильтры (или подобные им Беркефельда и др.) жидкости оставались неопределенно долго стерильными и, значит, не содержали микробов, которые задерживались фильтрацией.